微生物检测这个命题相信大家都不会陌生，毕竟我们都是从事这方面工作的。在实验室里，我们需要跟各种检测方法、细菌真菌以及检测设备等打交道，对微生物检测领域也肯定会存在这样或者那样的问题，面对这些问题你是怎么解决的？你有哪些好的微生物检测工作经验？

现就GB-《生物安全实验室建筑技术规范》建设实验室的具体细节心得写一写。写的不好还请多讨论及指正。

实验室建设需要考虑的因数比较多，具体分以下几个方面：

一、实验室安全级别定位。

首先就检测实验室的定位要清晰明确，是用于科研还是拿来生产和致病性有关的产品、还是用于饲养实验动物以及做第三方检测实验室，我们的实验室定位是第三方检验检测实验室，检测一部分致病菌，所以定位也就是安全生物分级所对应的BSL-2生物安全实验室，主要用于检测致病菌以及一些简单的病毒学检测。

个人理解的生物安全实验室根据实验对象的生物危害程度以及可采取的防护措施情况分成四级（方便记忆）：

1级—危害程度低，对健康成人及动植物不具有致病性，也就是说1级几乎是无害的。

2级—危害程度中等，对健康成人及动物不会造成严重危害，可以被有效预防及治疗。重点在于可以有效治疗和有效预防。是可控的。

3级—危害程度高（标准写高个体危害，低群体危害），对人及动物有高危害性，直接接触或通过气体传播，具高度感染性，有预防和治疗措施。也就是是可预防及救治的，但效果就是个未知数了。

4级--危害程度很高（高个体危害，高群体危害），对人和动物及环境高度危险，气溶胶传播或传播路径不明，具有未知致病因子，没有预防及治疗措施。简单的讲就是无药可解，当然乐观的讲这种无药可解也是相对的，4级危险级别当我们的医疗手段发达到一定程度，也可降为3级安全级别，比如SARS病毒，目前已归类到三级范围，有预防和治疗措施。

中华人民共和国卫生部制定的《人间传染的病原微生物名录》就是根据危害程度及安全实验室的安全级别来进行归类的。

二、BSL-2生物安全实验室建设需要注意的关键设备。

通过是否经过空气传播的生物因子实验室分成a（不经空气传播）b（经空气传播）二类实验室，b2类实验室指不能通过有效利用安全隔离装复制进行操作的实验室。

BSL-2生物安全实验室指生物安全级别为2级的生物实验室。

b2实验室的具有2个关键设备：生物安全柜，高压蒸汽灭菌器。

要建设好BSL-2级生物安全实验室除了要把实验室基础设施建设好之外就需要把这2个关键设备落实好。

具体有以下几点：

2.1生物安全柜及高压蒸汽灭菌锅的选购要求。

须购买具有生产资质正规厂家的生物安全柜的，并且根据实验室建设情况购置相匹配的生物安全柜。

因生物安全柜须与房间及周围通风系统密封连接，所以需要实验室建设还未完成之前在购买完成并放置到指定布局位置。如果房子造好了再去整安全柜就不那么好改造了。由此引申的一些较大的设备，如二人或三人联排的超净台，-80℃冰箱以及其他大型实验设备需考虑门高门宽以及用电符合问题。

高压蒸汽灭菌器，建议购买日本松下或厦门致微的灭菌锅，这2款灭菌锅的好处就是傻瓜式全自动，灭菌锅密封性好，故障率低，且具有专用排气筒，对周围环境造成湿度影响较小，安全系数高等特点。如果对灭菌锅使用有较高经验也可购买上海博迅50或70L灭菌锅，也比较方便。不建议因节约费用而购买手提式灭菌锅，因具有体积小，升降温膨胀快以及需要手动控制等缺点。

2.2生物安全柜校检的具体要求。

由于校检机构及校检人员的综合素质良莠不齐，所以在购置了生物安全柜之后，校检需就校检三个重要指标和校检机构进行确认，这三个主要技术指标就是：检漏，风速，洁净度。

检漏是生物安全柜特色的一个项目，是防止污染物回流到实验室造成污染的的一个预防性检查。

风速，生物安全柜的原理是采用负压双层箱体结构，风机在顶部产生正压，把一定风速的的垂直风（II级生物安全柜要求风速达到0.5m/s）送到操作台，进气流顺着操作台下面或侧面的隔栅，向操作台后面向上流动，与从后面隔栅流下的下沉气流相遇。混合，进入回风腔，然后在进入风机入口形成负压。30%的气流经顶部高效过滤器过滤后排出，从而阻止污染物排出外界。剩下70%经下沉气流高效过滤后，再次形成洁净循环风（II级生物安全柜的循环风和排风比例为70%:30%），，避免柜内产品或样品收到污染。

洁净度，II级生物安全柜要求洁净度达到级。

GB/T-医药工业洁净室（区）沉降菌测试方法的附录C附有技术要求半小时沉降菌不得超过1CFU/皿（万级不超过3CFU/皿,10万级不超过10CFU/皿）。

2.3高压蒸汽灭菌锅校检及使用要求。

目前就高压蒸汽灭菌锅要检定和不检定的争论一直持续不断，个人建议还是请专人来校检为宜，毕竟压力容器，马虎不得，尤其有些操作员只会操作并不一定懂得结构及安全须知的一些关键点。

高压蒸汽灭菌锅需要校检的部分主要是温度和压力。温度要校检我们实验灭菌所需的温度点，比如℃，以及灭糖化培养基的℃，以及保温用的℃等，如果有单位使用℃，也校检一下；压力方面，需联系专门的压力校检机构比如特种设备单位然后商议校检压力表的事宜。

2.4校检报告的确认。

经权威机构校检之后并出具的报告，我们取得报告后需对校检报告进行确认，确认不能流于形式，这是确认我们的设备是否满足我们使用要求的很重要的一步，首先确认报告上面关于送检单位信息、仪器型号、出厂编号等是否和我们的信息一致，再就是查看校检单位所使用的标准是否适宜。

然后根据检定规程、校检技术规范来核查此项设备校检结果是否满足要求，还要根据我们所使用设备需要来评价是否满足实验需要。如有问题需要和生产商及校检单位进行沟通协商解决。

三、从事微生物检验检测的实验室建设需要注意的方方面面。

生物实验室布局除了设计各检测实验室外，还要设计缓冲区域以及物流之中需要设计传递窗，并且具有紫外杀菌和单向联动开启功能（说白了就是放入开窗的时候里面的人不能同时可以开启传递窗）。

设计以简洁实用、流向清晰为主。不要设计成迷宫一般，人走进去都搞不清楚哪儿是哪儿，那么风流物流也就会乱糟糟的，这是教训。

生物实验室建设时要充分考虑设备、流向、电力配置等因素，不然会造成房子造好了、拆门搬运体积较大设备，或仪器运行起来电力不够等现象发生，或流向不清晰或有回路，造成交叉污染的可能性。

单向流问题，生物实验室建设的重点是清洁区和污染区的分区要明显，所以洁净风的流向以及人流、物流的走向很重要。

生物实验室要求洁净风，需要安装初、中、高空气过滤装置，风向一般有上送下排或上送上排，进风口应离地面2.5m以上，避开污染源。风流从洁净区到较低污染可能区再到较高污染可能区，要尽量减少风的回流和涡流。排风速度也要在一个范围内为宜，太高加速过滤器老化失效，太低带不动室内空气的流动，并且要本着“排风先于送风开启，后于送风关闭”的原则。

生物实验室用电，一般穿墙或用套管，尽量不走明线避免造成清洁死角，并且漏电保护装置要备全及合适。实验室用水，一般按照实验单元设置阀门及止回阀，洗手等设施靠近实验室出口处为宜。室必须配备洗眼及应急淋浴装置。防护区的污水处理装置可采用化学消毒或高温消毒灭菌方式。

生物实验室建设过程中选材一般选择不锈钢、铜质、无毒塑料等材质，建议不要选择木质材料，以免霉菌污染。

生物实验室门牌须有清晰表示，专用的生物危险符号（网上可购买粘贴），填写负责人及紧急联系电话等信息。

实验室建设完成，验收时候还需要注意的就是连接缝线，有许多实验室从表面上看超净间做的很漂亮，但仔细观察，会发现连接线没有拿胶粘好，或者排风口钉子没有上牢固，等等这些细节都是很重要的。